【摘要】目的：研究S100A4蛋白和上皮鈣粘蛋白(Ecadherin，Ecad)在人類上皮性卵巢腫瘤中的表達(dá)情況，探討并分析兩者與上皮性卵巢癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移發(fā)生的關(guān)系及其生物學(xué)意義。方法：采用免疫組織化學(xué)法SP法檢測(cè)S100A4蛋白和Ecad在上皮性卵巢腫瘤中的表達(dá)與分布，結(jié)合臨床病理情況分析兩者與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。結(jié)果：上皮性卵巢癌中S100A4的表達(dá)率比卵巢良性腫瘤和上皮性卵巢交界性腫瘤中的表達(dá)率增高(P<0.05);S100A4在上皮性卵巢癌中的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、有無(wú)轉(zhuǎn)移、有無(wú)腹水有關(guān)(P<0.05)，與臨床病理分期無(wú)關(guān)(P>0.05);Ecad在上皮性卵巢癌的表達(dá)與臨床分期、有無(wú)轉(zhuǎn)移、有無(wú)腹水有關(guān)(P<0.05)，而與組織學(xué)分級(jí)無(wú)關(guān)(P>0.05);S100A4,Ecad在上皮性卵巢癌中的表達(dá)與有無(wú)絕經(jīng)、腫瘤大小、臨床病理類型無(wú)關(guān)(P>0.05);上皮性卵巢癌中S100A4和Ecad的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0。385，P<0.05)。結(jié)論：S100A4和Ecad的相關(guān)表達(dá)與上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，是判斷上皮性卵巢癌生物學(xué)行為、預(yù)測(cè)侵襲轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】卵巢腫瘤;S100A4;鈣粘著糖蛋白類;腫瘤轉(zhuǎn)移

引言

侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤患者死亡的重要原因，腫瘤的轉(zhuǎn)移包括細(xì)胞骨架的丟失、癌細(xì)胞的脫落等過(guò)程，此過(guò)程與Ecad和轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白S100A4有非常密切的關(guān)系。S100A4蛋白是最近從S100蛋白家族篩選的一個(gè)與惡性腫瘤預(yù)后相關(guān)的一個(gè)因子^①，Ecad分布于細(xì)胞細(xì)胞黏附連接處，是介導(dǎo)相鄰細(xì)胞的同型黏附，其異常表達(dá)促使惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移^②。我們探討S100A4和Ecad的表達(dá)與上皮性卵巢癌的侵襲轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系，為臨床上上皮性卵巢癌的診斷治療、預(yù)后評(píng)估提供依據(jù)。

1、材料和方法

1.1 材料

標(biāo)本取自陜西省婦幼保健院和渭南市中心醫(yī)院200401/200703手術(shù)切除的上皮性卵巢腫瘤48例，均經(jīng)40g/L甲醛固定、常規(guī)脫水、包埋。其中良性上皮性卵巢腫瘤10例(漿液性囊腺瘤6例，黏液性囊腺瘤4例)，交界性卵巢腫瘤8例(漿液性交界性囊腺瘤5例，黏液性交界性囊腺瘤3例)，上皮性卵巢癌30例(漿液性卵巢癌18例，黏液性卵巢癌12例)，在卵巢癌患者中，所有患者術(shù)前均無(wú)化療放療史，無(wú)煙酒毒物接觸史，無(wú)癌癥家族史，按照國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)2000年標(biāo)準(zhǔn)，其中Ⅰ期6例，Ⅱ期8例，Ⅲ期9例，Ⅳ期7例;組織學(xué)分級(jí)：按WHO分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：其中Ⅰ級(jí)10例，Ⅱ級(jí)8例，Ⅲ級(jí)12例，并取同時(shí)期手術(shù)因其他良性疾病而切除的正常卵巢組織6例，所有患者年齡在30~69歲之間。

1.2 方法

S100A4多克隆抗體和EcadmAb購(gòu)自北京中杉生物技術(shù)公司，組化染色按SP試劑盒提供的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，中杉公司提供的陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替一抗行陰性對(duì)照。每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野，采用半定量計(jì)分法判定結(jié)果。Ecad以胞膜呈黃色或棕黃色為陽(yáng)性細(xì)胞，按陽(yáng)性細(xì)胞所占比例^③④計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，膜著色連續(xù)清楚且陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>75%定義為4分，著色淡不連續(xù)且陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)50%～75%定義為3分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)25%～50%定義為2分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<25%為1分，著色為棕黃色為3分，著色為黃色為2分，著色為淡黃色為1分，基本不著色為0分，>10%的細(xì)胞質(zhì)或胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒定義為異位表達(dá)，將每張切片平均著色程度得分與平均著色細(xì)胞百分率得分相乘為其最后得分，總分≥6者為陽(yáng)性表達(dá)，總分<6者為膜表達(dá)減弱，膜表達(dá)減弱或異位表達(dá)統(tǒng)一定義為陰性表達(dá)。S100A4的染色結(jié)果判定：S100A4以胞質(zhì)或胞核出現(xiàn)黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，高倍鏡下將陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10%為1分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在10%~50%為2分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>50%為3分，將<3分者為S100A4陰性表達(dá)，等于3分為陽(yáng)性表達(dá)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS11.5進(jìn)行分析，樣本率的比較用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法，S100A4與Ecad表達(dá)的相關(guān)性分析用Spearman等級(jí)相關(guān)法，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2、結(jié)果

2.1 S100A4及Ecad在正常卵巢組織和上皮性卵巢腫瘤中的表達(dá) S100A4在胞質(zhì)中表達(dá)，Ecad在胞膜中表達(dá)，且都在相應(yīng)部位呈棕黃色或棕褐色。S100A4和Ecad在正常卵巢組織無(wú)表達(dá)，Ecad表達(dá)從良性組、交界性組、惡性組呈逐漸減低的趨勢(shì)，而S100A4呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)，惡性組分別與良性組交界性組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。S100A4和Ecad在上皮性卵巢腫瘤中的表達(dá)

2.2 S100A4，Ecad的表達(dá)與上皮性卵巢癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系S100A4的表達(dá) 與組織分化、有無(wú)腹水、轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05);而與其他參數(shù)無(wú)關(guān)(P>0.05);組織分化越低，S100A4的表達(dá)越高(P<0.05);雖然S100A4在晚期卵巢癌的表達(dá)比早期卵巢癌增高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);Ecad的表達(dá)與臨床分期、有無(wú)轉(zhuǎn)移以及有無(wú)腹水有關(guān)(P<0.05,S100A4和Ecad表達(dá)與上皮性卵巢癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 S100A4和Ecad表達(dá)的相關(guān)性  30例上皮性卵巢癌組織中S100A4陽(yáng)性表達(dá)和Ecad陰性表達(dá)的共有15例，相關(guān)性分析結(jié)果顯示，卵巢癌組織中S100A4和Ecad的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.385，P<0.05)。

3、討論

S100A4是一個(gè)與惡性腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移等病理過(guò)程密切相關(guān)的蛋白，Kerisebilck等^⑤報(bào)道S100A4基因轉(zhuǎn)染小鼠乳腺細(xì)胞系后，細(xì)胞Ecad基因的表達(dá)減低，且細(xì)胞中catenin分布狀態(tài)發(fā)生紊亂，使Ecad不能正常介導(dǎo)同型細(xì)胞間的黏附，腫瘤細(xì)胞易脫離母體腫瘤而發(fā)生轉(zhuǎn)移。S100A4蛋白以共價(jià)鍵二聚體和非公價(jià)鍵二聚體存在于體內(nèi)，以共價(jià)鍵二聚體存在于細(xì)胞間質(zhì)中的S100A4蛋白的存在是細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)，細(xì)胞與細(xì)胞基質(zhì)相互作用的基礎(chǔ)，也是腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)，也是腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的病理基礎(chǔ)^①。Cho等^⑥研究發(fā)現(xiàn)S100A4的表達(dá)與結(jié)直腸癌的腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率密切相關(guān)，但與腫瘤的定位、大小及患者的生存時(shí)間無(wú)關(guān)。隨后對(duì)癌組織進(jìn)行S100A4基因突變的檢測(cè)，結(jié)果無(wú)S100A4基因突變的存在。

Jenkinson等^⑦研究發(fā)現(xiàn)S100A4蛋白的表達(dá)與細(xì)胞的異常增生及腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。本試驗(yàn)研究結(jié)果顯示S100A4的陽(yáng)性表達(dá)與臨床分期無(wú)關(guān)，雖然有報(bào)道S100A4在肺癌、結(jié)直腸癌的表達(dá)與臨床分期有關(guān)，但與Kikuchi等^④的研究結(jié)果一致，而且在Kikuchi的研究中發(fā)現(xiàn)對(duì)于同一期別的卵巢癌患者，S100A4在胞核的表達(dá)越高，與無(wú)胞核表達(dá)的組織相比，患者的生存期明顯縮短，特別是對(duì)于Ⅰ/Ⅱ期的卵巢癌患者。

現(xiàn)有研究表明Ecad表達(dá)變化可能與以下機(jī)制有關(guān)，如Ecad基因突變，基因啟動(dòng)子的甲基化，基因啟動(dòng)子上單個(gè)核苷酸的多態(tài)性以及腫瘤部位的蛋白酶活性升高等^⑧。本研究證實(shí)正常卵巢上皮細(xì)胞不表達(dá)Ecad，而在卵巢良性腫瘤中Ecad表達(dá)增高，可能Ecad在卵巢新生物的形成及向惡性發(fā)展過(guò)程中行使某種功能^⑨。本研究中我們發(fā)現(xiàn)Ecad的陽(yáng)性表達(dá)與臨床分期有關(guān)，分期為Ⅰ,Ⅱ期者表達(dá)高于Ⅲ,Ⅳ期，表明Ecad與腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移有關(guān)。Ecad表達(dá)下調(diào)將使同種細(xì)胞失去黏附，正常組織不能發(fā)育成形。對(duì)于惡性腫瘤而言則細(xì)胞極性喪失、呈現(xiàn)惡性細(xì)胞形態(tài)并具備侵襲性生長(zhǎng)的特性。當(dāng)Ecad活性正常瘤細(xì)胞不易從原發(fā)灶上脫落下來(lái)，而當(dāng)Ecad失活導(dǎo)致細(xì)胞間黏附作用下降和極性紊亂，促使腫瘤的轉(zhuǎn)移^⑩。研究發(fā)現(xiàn)，在膀胱癌、肺癌、腎癌、大腸癌等大多數(shù)腫瘤中均有Ecad的表達(dá)減弱或缺失，且與腫瘤的臨床分期，組織分化、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)有密切關(guān)系，是預(yù)示腫瘤進(jìn)展及預(yù)后的重要指標(biāo)之一^⑾，本試驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)分化程度低者，Ecad的陽(yáng)性表達(dá)也偏低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與我們的結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)不同有關(guān)。我們研究發(fā)現(xiàn)Ecad在惡性腫瘤中部分在胞質(zhì)表達(dá)可能是無(wú)功能的Ecad經(jīng)蛋白水解，產(chǎn)物釋放入胞質(zhì)所致。雖然S100A4和Ecad的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)有待進(jìn)一步研究，但S100A4可能通過(guò)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架動(dòng)力促進(jìn)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，引起Ecad表達(dá)下調(diào)，使其不能介導(dǎo)同種細(xì)胞的黏附，使腫瘤細(xì)胞脫離母體腫瘤而發(fā)生轉(zhuǎn)移^⑿。

近幾年對(duì)S100A4蛋白與腫瘤生物學(xué)行為的研究已受到重視，其在多種腫瘤的研究已相繼開(kāi)展，然而S100蛋白促腫瘤發(fā)生發(fā)展作用的具體機(jī)制尚未完全闡明，有待進(jìn)一步研究。S100A4蛋白和Ecad的關(guān)系密切，可能成為判斷腫瘤預(yù)后的一個(gè)指標(biāo)，為指導(dǎo)臨床治療提供一定的依據(jù)。

【參考文獻(xiàn)】

[1]Mazzuccheli L.Protein S100A4: Too Long Overlooked by Pathologists[J]? Am J Pathol,2002,160(1):7-13.

[2]Cobanoglu U,Ersoz S,Turgutalp H,et al.Correlation of Ecadherin expression with clinicopathological parameters in breast carcinoma[J].Saudi Med J,2004,25 (8):1024-1027.

[3]Kim JC,Roh SA,Kim HC,et al.Coexpression of carcinombryonic antigen and Ecadherin in colorectal adenocarcinoma with liver metastasis[J].J Gastrointest Surg，2003，7(7):931-938.

[4]Kikuchi N,Horiuchi A,Osada R,et al.Nuclear expression of S100A4 is associated with aggressive behavior of epithelial ovarian carcinoma:An important autocrine/paracrine factor in tumor progression[J].Jpn Cancer Assoc，2006，97(10):1061-1069.

[5]Keirsebilck A,Bonne S,Bruyneel E,et al.Ecadherin and metastasis (mts1/ S100A4) expression levels are inversely regulated in two tumor cell families.Cancer Res,1998,58(20):4587-4591.

[6]Cho YG,Kim CJ,Nam SW,et al.Overexpression of S100A4 is closely associated with progression of colorectal cancer [J].World J Gastroerrterol，2005，11 (31):4852-4856.

[7]Jenkinson S R,Barraclough R,West C R,et al.S100A4 regulates cell motility and invasion in an in vitro model for breast cancer metastasis [J].Br J Cancer,2004,90(1):253-262.

[8]Lee JO,Kwun HJ,Jung JK,et al.Hepatitis B virus X protein represses Ecadherin expression via activation of DNA methyltransferase1 [J].Oncogene, 2005,24(44): 6617-6625.

[9]Alper O,Marta L,Santis DE,et al.Anti-sense suppression of epidermal growth factor receptor expression alters cellular proliferation,cell-adhesion and tumorigenicity in ovarian cancer cells1[J].Int J Cancer,2000, 88(4):566-574.

[10]Cobanoglu U,Ersoz S,Turgutalp H,et al.Correlation of Ecadherin expression with clinicopathological parameters in breast carcinoma[J].Saudi Med J,2004,25 (8):1024-1027.

[11]Zhang S,Ji W,Liu C,et al.The relation of metastasis and prognosis with transforming growth factorbetal and Ecadherin exp ression in sup raglottic larynx squamous cell carcijnoma[J].Linchuang Erbiyanhouke Zazhi, 2006,20 (12):534537.

[12]Moriyama Kita M,Endo Y,Yonemura Y,et al.S100A4 regulates Ecadherin expression in oral squamous cell carcinoma[J].Cancer Lett，2005，230(2):211-218.